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OnelambdaHLA特异性抗体检测试剂盒(流式法 )
 
  • 详细介绍
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 

应用流式细胞仪确定特异性HLA抗体

 

       

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

          对于高致敏或高PRA的患者应用群体细胞或抗原制成的反应试剂板很难获得其HLA抗体的特异性.  为此我们介绍流式细胞仪单抗原磁珠法及其测定HLA抗体特异性的精确性.

          我们选择了110个单价HLA抗原的等位基因. . 其中包括A位的34个等位基因, B位点的57个等位基因和C位点的19个等位基因我们将这些单价的抗原包背在八种不同颜色的微磁珠上然后将这些磁珠混在一个试管内通过流式细胞仪检测出与这八种磁珠对应的HLA抗体. 

         结果显示此方法可准确地确定单价HLA抗体并且证实此种单价抗原组合比常规细胞抗原组合具有更高的精确性和敏感性.  例如我们检测了10位移植失败的患者血清检测出的HLA抗体与35个与供者不相容抗原中的31个抗原发生反应.重要的是所有这些抗体都不是针对患者自身抗原的抗体.

        我们的结论是流式细胞仪及单价抗原磁珠技术可提供敏感和高精确性的单价HLA抗体的检测该方法可有效地预测高PRA的移植患者和需要血小板输入的高致敏患者的阴性交叉反应.

         PRA (Panel Reactive Antibody, 群体反应抗体)检测开始于1971长期来该检测方法无法确定HLA抗体的特异性因为待检测的血清需与携带HLA抗体的细胞发生反应.  而细胞上的HLA抗原为多价包括A, B, CDR位点.  而来自细胞的抗原提取物也是多价的在许多情况下特别是高PRA血清, HLA抗体的特异性很难被确定理想的检测方法应该是每个反应只涉及一个抗原. 1979, Parham通过单克隆抗体层析技术纯化了HLA-A2B7抗原我们和其他的研究者也通过这种方法提纯HLA抗原并用此来检测HLA抗体然而此种方法受限于特异性单克隆抗体的有限数目.  且不同的抗原往往与共享的抗原决定族发生反应.  2000,  也既HLA抗体首次检测20年后, Barnardo等应用从大肠挨稀杆菌中获得的重组抗原纯化HLA-A2B8抗原这两个纯化的抗原可与血清中相对应的抗体发生反应.  他们认为在抗原的产生过程中并不需要糖基然而对许多HLA抗原而言情况并非如此因为机体在移植后的修饰作用可影响许多糖蛋白的功能为此我们建立了一个HLA的细胞表达系统这个系统可提供产生成熟HLA抗原的所有关键成份通过这个系统我们可以获得110个单一抗原的结构并通过流式细胞仪检测方法检测出HLA抗体用高PRA血清与此单价抗原组成的格局反应可精确地检测出抗体的特异性.

         通过重组DNA技术建立的110个单一HLA抗原的反应格局包括34A位点等位基因, 57B位点和19C位点的等位基因这些基因被分别包背在不同的微磁珠上当检测的血清与这些磁珠混合孵育后血清中的抗体便会与相应的抗原结合.由于不同的磁珠具有不同的色度流式细胞仪能够精确地识别不同磁珠的身份.而与抗体结合的阳性反应磁珠其荧光强度明显强于阴性反应的磁珠.  因此流式细胞仪可准确地识别某种或某些磁珠与抗体结合通过已知抗原确定检测的抗体特异性.

          通过单价抗原检测HLA抗体可排除其它抗原的干扰从而获得HLA抗体的特异性例如以往应用细胞板不能检测出的特异性抗体通过此方法而获得确定此外通过细胞板进行抗原决定族(CREG)分析而判断的阳性结果很可能是非反应抗原的干扰作用而单价抗原检测方法也可以排除非反应抗原的干扰作用. 

         鉴定高PRA血清中的HLA抗体特异性是临床亟待解决的问题由于高PRA而长期等待器官移植的患者尤其是危及生命的具有出血倾向性而需要输入血小板来维持的患者急需精确的HLA抗体检测手段以获得与其抗体不发生反应的供者器官单价抗原检测方法终于使我们能够检测出特异性抗体.